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胎牛血清運(yùn)用中遇到的常見問題
發(fā)布時(shí)間： 2019-04-30 點(diǎn)擊次數(shù)： 1675次1、 怎樣貯存和凍結(jié)血清才不會(huì)使產(chǎn)質(zhì)量量受損?
將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須留意的是，融解過程中必須規(guī)矩地?fù)u晃均勻。長(zhǎng)時(shí)間貯存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)或許集合而形成沉積或可見的混濁。因而，推薦在-20℃以下貯存血清，并防止反復(fù)凍融。
咱們主張血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超越一個(gè)月。若一次無法用完一瓶，主張無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。2、血清中包括絮狀沉積，它們是什么，怎樣處理?
沉積包括纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除掉沉積，離心血清(400g，1-2分鐘)或許簡(jiǎn)略的讓其沉積在瓶子底部，將血清當(dāng)心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無菌瓶里(一般不主張采用過濾的方法除掉沉積，因?yàn)槌练e會(huì)堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況悄悄搖擺沉積并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以，運(yùn)用產(chǎn)品時(shí)要搖擺并加熱血清至37℃，沉積會(huì)自然消失。3、實(shí)驗(yàn)室怎樣選擇適合的血清?
國(guó)內(nèi)一致以為HYCLONE的血清是好的，可是依據(jù)我在北美的閱歷，國(guó)外一般以為GIBCO比HYCLONE好，所以并不是價(jià)格決定質(zhì)量，可是總的來說這兩種價(jià)格普遍偏貴，一般不是太嬌氣的細(xì)胞，國(guó)產(chǎn)的就夠用了。此外，因?yàn)閲?guó)內(nèi)HYCLONE，GIBCO并沒有生產(chǎn)線，咱們只能從代理商那里買，而代理商又魚龍混雜，所以買到假貨的或許性也很大。所以，我一般會(huì)從直銷員那里買血清，有的國(guó)外生物公司因?yàn)閯倓傔M(jìn)入我國(guó)，度不高，可是其實(shí)在國(guó)外現(xiàn)已做得很不錯(cuò)了，如Wisent等，他們?cè)趪?guó)內(nèi)有辦事處，我會(huì)從那里拿，血清的質(zhì)量和HYCLONE平起平坐，但價(jià)格相對(duì)優(yōu)惠很多。4、 怎樣防止血清中發(fā)生沉積?
按如下操作可防止沉積的發(fā)生：
(1)凍結(jié)血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉積的發(fā)生。
(2) 血清分裝凍存時(shí)，須規(guī)矩?fù)u晃均勻(當(dāng)心勿形成氣泡)，使溫度與成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃凍結(jié)，因溫度改變太大，簡(jiǎn)單形成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉積。
(4) 勿將血清置于37℃太久，否則血清會(huì)變得污濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因而受到破壞，然后影響血清的質(zhì)量。
(5) 血清的熱滅活十分簡(jiǎn)單形成沉積物的增多，若非必要，可以無須做此過程。
(6) 若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的準(zhǔn)則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高，時(shí)間過久或搖晃不均勻，都會(huì)形成沉積物的增多。5、小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與留意事項(xiàng)?
來歷不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。組份與份額不同：兩者所含的促細(xì)胞成長(zhǎng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與份額不同，用途與用法不同：某些細(xì)胞必需胎牛血清才能成長(zhǎng)，而有些細(xì)胞只需小牛血清即可，運(yùn)用濃度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。
血清保存和運(yùn)用須留意：血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不行超越一個(gè)月。凍結(jié)血清時(shí) ，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，不行將冷凍的血清直接放入37℃水浴或許溫箱中，如放在37℃凍結(jié)，色彩加深，粘稠度也會(huì)添加，血清在凍結(jié)和熱滅活后，應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存，防止反復(fù)凍融。